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你知道什麼是轉染試劑麼·₪?一起來看看吧

發表時間✘╃:2022-07-04  |  點選率✘╃:435
  轉染(transfection)指真核細胞由於外源DNA摻入而獲得新的遺傳標誌的過程₪✘。DNA轉染技術的發展對現代分子生物學產生了巨大的影響₪✘。
 
  基因轉染技術不僅是研究轉基因和基因表達的重要工具✘₪◕··,而且是目前基因治療的關鍵步驟₪✘。理想的基因轉染試劑應該具有如下特點:高效轉染;安全;低細胞毒性;方法簡單;省時↟·◕◕、經濟₪✘。
 
  哺乳動物的轉染技術在60年代末70年代初即已引入₪✘。
 
  目前✘₪◕··,將外源DNA 匯入哺乳動物細胞的方法大致可分為兩大類✘₪◕··,即生物方法和物理化學方法₪✘。物理化學方法中常用的有磷酸鈣法↟·◕◕、顯微注射↟·◕◕、電穿孔↟·◕◕、脂質體介導的轉染✘₪◕··,以及最近出現的以高分子聚合物為載體的基因傳遞技術₪✘。
 
  生物方法則主要是以病毒作為載體,透過病毒感染的方式將外源DNA 匯入到細胞中, 其中以逆轉錄病毒及腺病毒轉染系統尤為常用₪✘。
 
  其中病毒載體的特點是整和效率高, 可使外源基因在宿主細胞中長期表達✘₪◕··,缺點是存在潛在的安全危險性₪✘。電穿孔法及顯微注射法的特點是轉染率較高✘₪◕··,缺點是需要昂貴的儀器✘₪◕··,前者對細胞的損傷較大✘₪◕··,後者在匯入DNA 時需要一個細胞一個細胞地注射✘₪◕··,不適合大量細胞研究的需要₪✘。
 
  磷酸鈣在良好的轉染條件下✘₪◕··,可以在293T等細胞的轉染達到較高的轉染效率₪✘。但磷酸鈣轉染有一個突出的問題✘₪◕··,非常不穩定✘₪◕··,尤其受PH值的影響非常大✘₪◕··,在實驗中使用的每種試劑都必須小心校準✘₪◕··,保證質量✘₪◕··,因為甚至偏離*條件十分之一個PH都可能導致磷酸鈣轉染的失敗✘₪◕··,經常即使最熟練的轉染實驗者也不能保證磷酸鈣轉染的成功✘₪◕··,他們可能經常為莫名其妙的轉染失敗而沮喪₪✘。
 
  同時✘₪◕··,他們還經常發現✘₪◕··,往往小體積的轉染比如6孔板以下的轉染效果比較理想✘₪◕··,可一換到大皿✘₪◕··,經常轉染效率下降很快₪✘。磷酸鈣的先天缺陷往往是實驗梗阻的主要原因₪✘。

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